ปัจจัยที่มีผลต่อการทำงานของเอนไซม์ มีดังนี้
1. ชนิดของเอนไซม์
2. ความเข้มข้นของเอนไซม์
3. ความเข้มข้นของสารตั้งต้น (Substrate)
4. ความเป็นกรด - เบสของสารละลาย ค่า pH ที่เหมาะสมที่สุดคือ 7.4
5. อุณหภูมิ ภาวะที่เหมาะสมที่สด คือ 37 0C
6. การยับยั้งปฏิกิริยาของเอนไซม์ (Enzyme Inhibitors)
7. ตัวทำละลาย เช่น เอทานอล
